Alakaʻi ʻEpekema Kauwela: Ke Hālāwai ka Hawewe Wela 40°C me nā Hoʻokolohua Molekala

Ua mau ke kiʻekiʻe o ka mahana ma ka hapa nui o Kina i kēia mau lā aku nei. Ma ka lā 24 o Iulai, ua hoʻopuka ka Shandong Provincial Meteorological Observatory i kahi leka hoʻomaopopo mahana kiʻekiʻe melemele, e wānana ana i nā mahana "e like me ka sauna" o 35-37°C (111-133°F) a me 80% ka haʻahaʻa no nā lā ʻehā e hiki mai ana ma nā wahi o uka. Ke kokoke nei nā mahana ma nā wahi e like me Turpan, Xinjiang, i 48°C (111-133°F). Aia ʻo Wuhan lāua ʻo Xiaogan, Hubei, ma lalo o kahi leka hoʻomaopopo ʻalani, me nā mahana e ʻoi aku ana ma mua o 37°C ma kekahi mau wahi. I loko o kēia wela wela, ke ʻike nei ka honua microscopic ma lalo o ka ʻili o nā pipette i nā haunaele maʻamau - ua hoʻopilikia mālie ʻia ke kūpaʻa o nā waikawa nucleic, ka hana o nā enzymes, a me ke kūlana kino o nā reagents e ka nalu wela.

Ua lilo ka unuhi ʻana o ka waikawa nucleic i mea hoʻokūkū me ka manawa. Ke ʻoi aku ka mahana o waho ma mua o 40°C, ʻoiai me ke ea ea e hoʻā ana, ʻoi aku ka mahana o ka papa hana ma luna o 28°C. I kēia manawa, ʻoi aku ka wikiwiki o ka palaho ʻana o nā hāpana RNA i waiho ʻia ma kahi ākea ma mua o ka ʻelua o ka wikiwiki ma mua o ka pūnāwai a me ka hāʻule. I ka unuhi ʻana o ka bead magnetic, ua hoʻomaʻū ʻia ka hopena buffer ma kahi kūloko ma muli o ka wikiwiki o ka volatilization o ka solvent, a maʻalahi ka precipitate kristal. E hoʻoulu kēia mau kristal i nā loli nui i ka pono o ka hopu ʻana i ka waikawa nucleic. Hoʻonui like ka volatility o nā solvents organik. Ma 30°C, piʻi ka nui o ka volatilization chloroform ma 40% i hoʻohālikelike ʻia me 25°C. I ka wā o ka hana, pono e hōʻoia i ka wikiwiki o ka makani i loko o ka fume hood he 0.5m/s, a hoʻohana i nā mīkina lima nitrile e mālama i ka pono pale.

Ke kū nei nā hoʻokolohua PCR i nā haunaele mahana paʻakikī. ʻO nā reagents e like me ka Taq enzyme a me ka reverse transcriptase he mea maʻalahi loa ia i nā loli koke o ka mahana. ʻO ka condensation ma nā paia o ka paipu ma hope o ka wehe ʻana mai kahi pahu hau -20°C hiki ke hana i ka nalowale o ka hana enzyme ma mua o 15% inā komo ia i loko o ka ʻōnaehana hopena. Hiki i nā hopena dNTP ke hōʻike i ka hōʻino ʻike ʻia ma hope o 5 mau minuke o ka hōʻike ʻana i ka mahana o ka lumi (>30°C). Hoʻopilikia ʻia ka hana o ka mea hana e nā mahana kiʻekiʻe. Ke >35°C ka mahana o ka hale hana a me ka lawa ʻole o ka hoʻokuʻu ʻana o ka wela o ka mea hana PCR (<50 cm mai ka paia), hiki i ka ʻokoʻa o ka mahana kūloko ke hiki i ka 0.8°C. Hiki i kēia ʻokoʻa ke hana i ka pono o ka hoʻonui ʻana ma ka lihi o kahi pā 96-well e hāʻule ma mua o 40%. Pono e hoʻomaʻemaʻe pinepine ʻia nā kānana lepo (hoʻemi ka hōʻiliʻili lepo i ka pono o ka hoʻokuʻu ʻana i ka wela ma 50%), a pono e pale ʻia ka ea ea pololei. Eia kekahi, i ka wā e hana ai i nā hoʻokolohua PCR i ka pō, e pale i ka hoʻohana ʻana i ka mea hana PCR ma ke ʻano he "haumākū makeshift" e mālama i nā laʻana. ʻO ka mālama ʻana ma 4°C no nā hola he ʻoi aku ma mua o 2 hiki ke hoʻoulu i ka hoʻoulu ʻia ʻana o ka condensation ma hope o ka pani ʻana o ke poʻi wela, e hoʻoheheʻe ana i ka ʻōnaehana hopena a hiki ke hōʻino i nā modula metala o ka mea kani.

I ke alo ʻana i nā ʻōlelo aʻo e pili ana i ka mahana kiʻekiʻe, pono e hoʻokani pū nā keʻena hoʻokolohua molekala i ka alarm. Pono e mālama ʻia nā laʻana RNA makamae ma ke kua o kahi pahu hau -80°C, me ke komo ʻana i kaupalena ʻia i nā wā mahana kiʻekiʻe. ʻO ka wehe ʻana i ka puka o kahi pahu hau -20°C ma mua o ʻelima mau manawa i ka lā e hoʻonui ai i nā loli o ka mahana. Pono nā lako hana wela kiʻekiʻe ma ka liʻiliʻi he 50 cm o kahi hoʻoheheʻe wela ma nā ʻaoʻao ʻelua a me nā ʻaoʻao hope. Eia kekahi, ua ʻōlelo ʻia e hoʻoponopono hou i ka manawa hoʻokolohua: 7:00-10:00 AM no nā hana koʻikoʻi i ka mahana e like me ka unuhi ʻana o RNA a me ka hoʻouka ʻana o qPCR; 1:00-4:00 PM no ka hana hoʻokolohua ʻole e like me ka nānā ʻana i ka ʻikepili. Hiki i kēia hoʻolālā ke pale pono i nā piko wela kiʻekiʻe mai ke komo ʻana i nā ʻanuʻu koʻikoʻi.

ʻO nā hoʻokolohua molekala i ka wā wela he hoʻāʻo ia o ke ʻano hana a me ke ahonui. Ma lalo o ka lā kauwela mau loa, malia paha ua hiki i ka manawa e waiho i kāu pipette a hoʻohui i kahi pahu hau hou i kāu mau laʻana e ʻae i ka mea kani e hoʻokuʻu i ka wela hou aku. ʻO kēia mahalo no nā loli o ka mahana ka mea waiwai nui loa i ka wā o nā mahina kauwela wela—ma hope o nā mea a pau, i ka wela 40°C o ke kauwela, pono nā molekala i kahi "wahi polar artificial" i mālama pono ʻia.